实验前准备工作
研钵、镊子、剪刀、75%的酒精、无尘纸巾、专用容器盛液氮。
1、使用75%的酒精擦拭移液枪以及实验台；
2、取经过260℃高温灭菌>6h冷却后的研钵（或经RNaZap处理后的研钵）；
3、镊子、剪刀需经紫外灭菌30min，使用前用75%酒精擦拭；
4、每份研钵下面垫上纸写好样本编号，按照顺序依次放好，防止样本混乱；
5、每份样本使用单独的研钵、镊子、剪刀等取样工具，防止交叉污染，且取样工具需要远离垃圾桶，防止污染样本；
6、根据样本实际情况准备好所需工具再进行取样研磨步骤。
液氮研磨步骤
1、将研钵从烘箱内拿出，用专用容器盛一些液氮备用；
2、将液氮小心加入并浸满研钵，浸泡预冷研杵与研钵（加入液氮时，缓慢加入，防止液氮飞溅）；
3、当第一次加入的液氮挥发完全后，立即向研钵中缓慢加入约1/2研钵体积的液氮（若组织块较大或较多的情况下可浸满研钵），将组织迅速转移至液氮内，确保组织全部浸没在液氮中；
4、使用研杵在液氮中轻轻敲打组织，将组织打碎成小块，要注意切勿用力过度，要防止组织块飞溅出研钵；在液氮即将挥发完时，使用研杵对组织样本进行碾压研磨（注意，若为植物样本可直接用研杵碾压组织）；
5、待液氮挥发完后，立即加入1/3研钵体积的液氮（注意，加入液氮速度要缓慢，切勿使得液氮冲击力过大，将组织样本冲出研钵），迅速用研杵研磨组织，根据组织状态的变化程度，在确保组织始终处于冰冻状态下，及时补充液氮进行研磨，（一般30s~1min补充一次，至少需要补充3次以上），直至组织被研磨成粉末状。
6、当组织研磨成粉末状后立即加入合适体积的裂解液进行组织裂解，若裂解液冻于研钵内壁，用研杵轻轻敲击下来，继续研磨让组织粉末与裂解液充分混合，研磨成糊状后进行下一个样本的取样操作；
7、静置至样本和裂解液混合物融化，将已经融化成液体状态的样本转移至离心管中，插入冰块上暂存。
其他注意事项
1、预冷时加1-2次液氮即可，液氮加入次数过多会导致研钵/杵结霜，稀释裂解液（同理，在研磨过程中要快速研磨，减少加液氮的次数，对于难以研磨的组织，若研钵和研杵上结霜后，需用干净的无尘纸巾把霜擦掉，注意不要接触到组织）；
2、取样过程要迅速、精准，不要让样本暴露在空气中过长的时间，接触样本的镊子需要提前灭菌，使用前75%的酒精擦拭以避免交叉污染；
3、研磨过程中要及时补充液氮，液氮量浸没过组织面即可，保证组织的低温性；
4、研磨过程要朝着一个方向研磨，组织尽量磨成粉末状再加裂解液；
5、液氮、裂解液均对人体有危害，注意避免直接皮肤接触，禁止在该实验中穿短裤、凉鞋等会暴露皮肤的服装，必要时可以带上护目镜以保护面部安全。
今天的实验笔记就分享完了，大家记得收藏起来学习哦~
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